血清中16种全氟及多氟烷基化合物的测定-超高效方案

简介

本方法使用创新型分体式HMR净化管/96孔板结合96孔正压固相萃取装置一步式净化血清样品，再通过LC-MS/MS进行检测，回收率达90%左右。样品处理过程简单，结果准确。

方法优势

Ø                      蛋白沉淀和磷脂去除一步完成，可有效去除血清中蛋白、磷脂类化合物对实验结果的影响

Ø                      通过式净化，极大简化前处理步骤，约1h即可完成前处理操作

Ø                      上样量仅需50μL，大大节省了宝贵的样品

Ø                      试剂耗材使用量更少，更加环保节约

Ø                      柱效远超直通式SPE，回收率稳定，可达90％左右

配套设备及耗材

样品前处理

仪器条件

1）色谱条件

色谱柱：Leosil C18/PFP核壳柱 (2.7µm, 100* 2.1mm）

流动相：5mmol/L乙酸铵甲醇（A），5mmol/L乙酸铵水溶液（B）

流速：0.4mL/min

柱温：50℃

进样量：2μL

流动相梯度表

2）质谱条件

AB 6500+质谱检测器采用多反应检测模式（Multiple

Reaction Monitoring，MRM），ESI负离子模式。

离子源：电喷雾离子源；

扫描方式：负离子扫描；

检测方式：多反应离子监测（MRM）；

电喷雾电压：-4500V；

离子源温度：400℃；

辅助气1：60psi；

辅助气2：60psi；

气帘气：30psi；

碰撞气体：Medium

目标PFASs的离子对、锥孔电压、碰撞能量等参数见下表

方法定量限

在以下两种方法中取最大值作为本项目的方法定量限（Limit of quantification，LOQ）：（1）在实际血清基质中满足信噪比大于10的最低浓度，信噪比采用RMS（Root Mean Square，RMS）方法；（2）标准曲线工作范围内满足实测浓度在理论值偏差±20％之内的最低浓度。由于本研究中样品未经浓缩和稀释，无稀释倍数，因此方法定量限即为LOQ，如下表。

16种PFASs的定量限

回收率和精密度

血清中16种全氟化合物不同水平加标回收率和精密度（n=6）

实验注意事项

1、内标体积太小（50、20微升），稍微有损失，就会影响定量，所以建议先加样品、再加内标，最后加乙腈；

2、加液体过程中，一定注意尽量让移液枪的枪头接近净化管中最上层筛板加液。需要正确使用移液枪，特别是小体积加样时；

3、建议分两次加入乙腈。如果只加一次乙腈，可能洗脱不完全，净化管里有残留。压完一次，加入乙腈，再正压；

4、乙腈：血清的比例从3：1开始优化；

5、其他项目根据化合物的性质选择甲醇或乙腈作为提取溶剂。