EZsep™ AFB&G免疫亲和柱用于玉米中黄曲霉毒素B族的检测

前言：

黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，简写为AFB1）是已知的化学物质中致癌性非常强的一种，对人和动物具有强烈的毒性，其毒性作用主要是对肝脏的损害。

黄曲霉毒素B1存在于土壤，动植物各种坚果，特别是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、调味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。一般以热带和亚热带等南方高温、高湿地区受污染最为严重，食品中黄曲霉毒素的检出率比较高。黄曲霉毒素耐热，280℃才可裂解，故一般烹调加工温度下难以被破坏。国家质检总局规定黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。

本文参考《GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定 第三法为高效液相色谱-柱后衍生法》，利用EZsep^TM AFB&G免疫亲和柱（3mL，20/pk，货号：PZ24102）净化样品，再通过高效液相色谱仪进行检测，建立了一种玉米中黄曲霉毒素B族的分析方法。

关键词：

黄曲霉毒素B族，免疫亲和，高效液相色谱

1 实验过程

1.1 仪器与试剂

SPE1000全自动固相萃取系统，北京bat365在线唯一官网登录股份有限公司；

LC600二元高压梯度高效液相色谱（北京bat365在线唯一官网登录股份有限公司）配光化学衍生器；

E.T.氮吹浓缩仪（货号：C020017），北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

冷冻离心机，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科学仪器厂；

EZsep^TM AFB&G免疫亲和柱（3mL，20/pk，货号：PZ24102），北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

甲醇（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

乙腈（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

超纯水；

0.1%吐温-水：1mL的吐温-20，加水定容至1L。

1.2 工作液配制

乙腈中4种黄曲霉毒素混标储备液：1.0μg/mL，坛墨质检 。

黄曲霉毒素混标中间液：移取黄曲霉毒素混标储备液1mL，用甲醇稀释至10mL容量瓶中，配制成浓度为100ng/mL的中间液。

黄曲霉毒素混标工作液：移取黄曲霉毒素混标中间液1mL，用甲醇稀释至10mL容量瓶中，配制成浓度为10ng/mL的工作液。

分别移取100ng/mL的黄曲霉毒素混标中间液10μL、50μL、200μL、500μL、1 000μL至10 mL容量瓶中，用初始流动相定容至刻度，得到浓度依次为0.1 ng/mL、0.5 ng/ml、2.0 ng/ml、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL的标准工作溶液。

1.3 实验部分

1.3.1 样品制备

 称取5g玉米试样(精确至0.01g)于50mL离心管中，加入20.0mL甲醇-水溶液(70+30)，涡旋混匀，用均质器10000r/min上下震荡均质3 min，在6000r/min下离心20min。准确移取4mL上清液，加入46mL0.1%吐温-水，混匀，待净化。

1.3.2 净化与浓缩

将低温保存的EZsep^TM AFB&G免疫亲和柱（3mL，20/pk，北京莱伯帕兹检测科技有限公司，货号：PZ24102）恢复至室温，待免疫亲和柱内原有液体流尽后，移取上述待净化液上样，上样结束后用20mL水分2次淋洗萃取柱，之后在真空状态下干燥1min，最后用2mL甲醇洗脱。洗脱液在40℃下氮吹浓缩至近干，再用流动相定容至1 mL，涡旋混匀，0.22μm滤膜过滤，待检测。

1.3.3 高效液相色谱检测条件

色谱柱：Promosil C18（5μm，4.6*250mm）

波长：激发波长360nm，发射波长440nm

流速：1.0mL/min

柱温：40℃

进样量：20μL

流动相：超纯水：甲醇+乙腈（50+50）=68:32

2 实验结果

图1 标准样品色谱图

图2 加标样品色谱图

图3空白样品色谱图

3 结论 

本实验使用EZsep^TM AFB&G免疫亲和柱（3mL，20/pk，北京莱伯帕兹检测科技有限公司，货号：PZ24102）对玉米中黄曲霉毒素B族进行净化后通过高效液相色谱仪进行检测，该方法的加标回收率在81.1%~93.2%之间，RSD在2.2%~2.7%之间。回收率和稳定性满足标准要求，说明EZsep^TM AFB&G免疫亲和柱能很好的完成方法中的净化工作，并且结果稳定、可靠。

4 参考文献

[1] GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定 第三法高效液相色谱-柱后衍生法

表1  加标回收率