耗材专区 | EZsep™WAX固相萃取柱应用于肉制品中合成着色剂的检测

前言

GB 5009.35-2023食品中合成着色剂的测定标准将于2024-03-06起实施，本次标准修订在现有检测方法的基础上，扩充了能够检测的食品基质类型和着色剂种类，覆盖了GB 2760-2014中规定的11种合成着色剂（分别为柠檬黄、新红、菜红、蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、唾咻黄、赤藓红和酸性红），以及允许添加的所有基质大类中的25种典型基质。同时前处理方法也由聚酰胺粉变更为WAX混合型弱阴离子交换反相吸附或等效固相萃取柱。

本实验参考标准《GB 5009.35-2023 食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》，使用EZsep™WAX固相萃取柱净化样品，再通过E.T.氮吹浓缩仪浓缩，高效液相色谱进行检测，建立了肉制品中合成着色剂的分析方法。

1、实验过程

1.1 仪器与试剂

LC-20AD液相色谱仪，岛津企业管理（中国）有限公司；

MPREP-SPE08手动固相萃取装置，货号：PZ0008，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

E.T.氮吹浓缩仪，货号：C020017，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

EZsep™WAX固相萃取柱（150mg/6mL），货号：PZ12103，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

冷冻离心机，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科学仪器厂；

甲醇（色谱纯），购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

甲酸，氨水，无水乙醇，乙酸铵，等化学品均为分析纯或以上，购自国药集团化学试剂有限公司；

水中11种色素混标，100μg/mL，坛墨质检科技股份有限公司。

1.2 工作液配制

取色素混合标准溶液1mL，用水稀释至10mL容量瓶中，配制成浓度为10μg/mL的色素混标中间液。

移取10μg/mL的色素混标中间液0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0mL，分别用水稀释至1.0mL容量瓶中，得到浓度依次为0.2、0.5、1、2、5、10μg/mL的标准系列工作液。

1.3 实验部分

准确称取试样2.0g，置于50mL具塞离心管中，先加入20mL石油醚,涡旋1min，超声提取10min，10000r/min离心5min，弃去上清液，加入25mL乙醇氨水溶液，50℃超声提取20min，10000r/min离心10min，取上清液置于50mL容量瓶中，每次加入约5mL乙醇氨水溶液重复提取操作四次，离心后合并上清液于50mL容量瓶中，用乙醇氨水溶液定容至刻度即得提取液。准确吸取提取液10mL，50℃氮气浓缩至3mL左右，分3次共加入10mL5%甲醇水溶液溶解，作为待净化液，待净化。

将EZsep™WAX固相萃取柱（150mg/6mL，货号：PZ12103）依次用6mL甲醇、6mL水活化后，取1.3.1待净化液上样，上样结束后再依次用6mL2%甲酸水溶液、6mL甲醇淋洗固相萃取柱，之后用氮气吹干萃取柱2min，以6mL 2%氨化甲醇溶液洗脱并收集洗脱液，经E.T.氮吹浓缩仪在50℃下氮气浓缩至近干，再加0.2mL甲醇，用0.02mol/L乙酸铵稀释至2.0 mL，涡旋1min，PTFE微孔滤膜过滤，高效液相色谱测定。

1.4 LC分析

色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）

流动相：A：0.02mol/L乙酸铵溶液 B：甲醇；

流速：1.0mL/min

检测波长：415nm、520nm、610nm

进样量：10μL

表1 流动相梯度洗脱表

2、       实验结果

表2 加标回收率结果

图1 1.0μg/mL混标色谱图

图2 样品加标色谱图

图3 空白样品色谱图

3、结论

本实验使用EZsep™WAX固相萃取柱（150 mg/6mL，货号：PZ12103，北京莱伯帕兹检测科技有限公司）对肉制品中合成着色剂进行净化后测定，该方法的加标回收率在62.2%~95.0%之间，RSD在0.5%~3.9%之间。准确性和精密度均满足GB 5009.35-2023要求，且实验方法稳定、可靠。

4、参考文献

[1] GB 5009.35-2023 食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定