解决方案 | 固相萃取-LC-MS/MS测定牛血清中的全氟化合物

前言

全氟和多氟烷基化合物（PFAS）由数千种物质组成，由于其含有极其稳定的碳氟键，使得此类物质具有很强的化学稳定性、表面活性、优良的热稳定性和疏水疏油性，被广泛应用于工业生产和生活消费领域，PFOA、PFOS、PFHxA、PFHxS等都属于PFAS。

PFAS被广泛应用于日用品、食品包装等产品，人们在日常生活中使用这些包含PAFS的消费品从而接触到该物质，大部分的PFAS如PFOA和PFOS，不会在环境或人体内分解，长时间在生物体内存留，随着时间的推移，人体会产生诸多健康问题。

本实验参考《超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道肼高分辨质谱法同时测定血清中12种全氟化合物》，利用bat365体育在线SPE 1000全自动固相萃取系统和M64高通量平行浓缩仪进行相关方法研究。

1、实验部分

1.1仪器与试剂

SPE 1000全自动固相萃取系统，bat365体育在线

M64高通量平行浓缩仪，bat365体育在线

液质联用仪：Exion LC™ + Triple Quad™ 4500，SCIEX

10种PFAS标准使用液：200ng/mL，溶剂体系为甲醇

M2PFOA和M4PFOS（内标）使用液：1μg/mL，溶剂体系为甲醇

HLB固相萃取柱：30mg/1mL，bat365体育在线

1.2前处理过程

1.2.1样品制备

在15mL离心管中分别加入500μL牛血清、内标（20ng/mL）50μL，pH=5.0的乙酸-乙酸铵缓冲溶液250μL，漩涡混匀后于37℃水浴4h。

冷却至室温后加入500μL乙腈，漩涡混匀，然后在10000 r/min条件下离心10min，取上清液置于20mL样品瓶，按照图1所示的方法进行固相萃取实验。

图1 血清中全氟化合物固相萃取流程

洗脱液在60℃条件下氮吹至近干，加入1mL 96%甲醇进行复溶，然后过0.22μm滤膜转移至样品瓶待 LC-MS/MS分析。

1.2.2加标样品测定

取6个15mL离心管，分别加入500μL牛血清、内标（20ng/mL）和全氟化合物标准溶液（20ng/mL）各50μL，然后按照步骤1中的操作进行前处理，最后得到样品加标溶液待LC-MS/MS分析。

1.3LC-MS/MS测定条件

色谱柱：Shim-packVeloxC18（2.7μm，2.1*100mm）

柱温：40℃

进样量：10μL

流动相：A:20mmol/L乙酸铵水溶液，B:甲醇（梯度洗脱程序见表1）

流速：0.30mL/min

检测方式：多反应监测（MRM），定量、定性离子对见表2

表1 梯度洗脱程序

表2目标物的MRM选择离子对

2、测定结果

2.1色谱图

图2 全氟化合物标样色谱图

图3 样品加标色谱图

2.2加标回收率

血清中全氟化合物经固相萃取、浓缩等前处理，LC-MS/MS检测，得到加标回收率及重复性，具体结果见表3。

表3 血清中全氟化合物加标回收率结果

总结

本文参考《超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道肼高分辨质谱法同时测定血清中12种全氟化合物》中的方法，使用bat365体育在线SPE 1000全自动固相萃取系统和M64高通量平行浓缩仪，对牛血清中的10种全氟化合物进行萃取和浓缩，并用液相色谱分离，电喷雾离子源（ESI）电离，多反应监测模式（MRM）检测。从表3可以看出，牛血清中5种全氟化合物有检出，其中含量较高的为PFOA和PFOS，分别为0.59μg/L和0.50μg/L；10种全氟化合物的加标回收率为53.6%-117.8%，RSD为4.9%-12.1%。

bat365体育在线SPE 1000全自动固相萃取系统可实现最多八个样品同时上样，具备上样及部分上样两种上样模式，同时收集架可直接放入M64高通量平行浓缩仪中进行氮吹浓缩操作，中间无需样品转移可提高实验效率及减少目标物损失，两款仪器无本底残留且使用方法简便，适用于血清中全氟化合物的检测分析。

参考文献

王铮,张济明,郭剑秋,等.超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道肼高分辨质谱法同时测定血清中12种全氟化合物[J].环境与职业医学,2021,38（3）:238-244,253.